col-r0101 試劑盒應(yīng)用 本試劑盒采用利裂解液配方在 10 分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無(wú)需使用蛋白酶 k、無(wú)需低溫離心，無(wú)需使用有機(jī)試劑。該配方中含有 rna 保護(hù)劑，能夠抑制rna降解、保護(hù)rna 完整，從而提高 rna 產(chǎn)量。提取 rna 可用于 rt-pcr、rt-qpcr、northern blot、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等。 本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。
保存條件
室溫保存一年。
自備材料
水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、無(wú) dnase 無(wú) rnase 離心管、dnase i（2u/μl，或貨號(hào)qr0102）使用方法
1. 樣本處理
1.1 從動(dòng)物組織中提取 rna
1.1.1 取 20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨后，加入 700μl 裂解液 c，顛倒混勻。或者取 20-100mg 樣本加入 700μl 裂解液 c，加入 1 顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2 分鐘。備注：不同樣本中 rna 含量差異很大，過(guò)多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞，終導(dǎo)致rna提取量下降。
1.1.2 55℃孵育 1 分鐘。
1.1.3 12,000rpm 離心 1 分鐘，取 500μl 上清。
1.1.4 加入 250μl 無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。
1.2 從懸浮細(xì)胞中提取 rna
1.2.1 細(xì)胞 1,000rpm 離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。
1.2.2 細(xì)胞數(shù)量為<5x106個(gè)時(shí)，加入 500ul 解液 c。細(xì)胞數(shù)量為 5x106~1x107個(gè)時(shí)，加入 700ul 裂解液 c。輕輕吹打混勻。55c孵育 1分鐘。
1.2.3 12.000rpm 離心1 分鐘。
1.2.4 細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6個(gè)時(shí)，取 450μl 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，取650μl 上清。
1.2.5 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。
1.3 從貼壁細(xì)胞中提取 rna
1.3.1 胰酶消化細(xì)胞后 1,000rpm 離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。
1.3.2 細(xì)胞數(shù)量為<5×10 6個(gè)時(shí)，加入 500μl 裂解液 c。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，加入700μl裂解液 c。輕輕吹打混勻。55℃孵育 1 分鐘。 1.3.3 12,000rpm 離心 1 分鐘。 1.2.4 細(xì)胞數(shù)量為><5×10 6個(gè)時(shí)，取 450μl 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，取650μl上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。>為<5×10 6個(gè)時(shí)，取 450μl 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個(gè)時(shí)，取650μl上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。
2. rna 純化
2.1 全部加入 rna 吸附柱中，12,000rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中廢液。
2.2 向 rna 吸附柱中加入 500μl 洗滌液 cw1，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液。
2.3 向 rna 吸附柱中加入 500μl 洗滌液 cw2，12,000rpm 離心 30 ，倒掉收集管中廢液。
2.4 重復(fù)步驟 2.3 一次。
2.5 12,000rpm 離心 2 分鐘，倒掉收集管中廢液。
2.6 將 rna 吸附柱放入無(wú) dnase 無(wú) rnase 離心管中，加入 30-50μl 洗脫液c，室溫放置1 分鐘。
2.7 12,000rpm 離心 2 分鐘，得到 rna 溶液，-80℃保存。
注意事項(xiàng)
1. 務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作，常換手套，防止 rna 降解。
2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行 rna 提取。
3. 使用無(wú) dnase 無(wú) rnase 的吸頭和離心管，防止 rna 降解，常更換吸頭，防止交叉污染。
4. 為了提高洗脫效率，可提將洗脫液 c 置于 65℃水浴后再使用。
5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求，請(qǐng)使用 dnase i（貨號(hào) qr0102）進(jìn)行基因組清除。