前言
雪卡毒素(也稱西加毒素)中毒是由雪卡毒素（ctxs）引起的，是世界上常見的食物中毒來源之一，據(jù)調(diào)查，ctxs每年大約造成5萬人中毒，是造成人類中毒分布較廣、人數(shù)較多的一種海洋毒素之一。目前發(fā)現(xiàn)ctx的類似物有30余個。
雪卡毒素是一種由底棲甲藻產(chǎn)生的熱穩(wěn)定脂溶性聚醚毒素，在天然樣品中以微量存在，當(dāng)濃度達(dá)到0.2μg/ kg時具有神經(jīng)毒性作用，ctxs的半數(shù)致死量（median lethal dose，ld 50）為0.45μg/kg，比河豚毒素（tetrodotoxin，ttx）的毒性還要強100倍，是重要的神經(jīng)毒素。美國 fda 和 efsa 建議控制水平為 0.01μgctx1b 當(dāng)量/kg。
根據(jù)島津新發(fā)布的一項技術(shù)，通過向流動相中添加非常少量的堿金屬（如na+和li+）來優(yōu)化一種使用鈉和鋰加合物[m+na]+和[m+li]+離子檢測ctxs的高靈敏度方法。通過這項技術(shù)，可以使用lcmsms成功分離及檢測fda推薦的低濃度的ctxs。本文介紹了[m+li]+新方法的分析條件和準(zhǔn)確度。
ctxs標(biāo)準(zhǔn)品
l1、5種ctx類似物的標(biāo)準(zhǔn)品由jfrl（日本食品分析中心）提供
l2、9種ctx類似物的混標(biāo)樣品由nihs（日本國立醫(yī)藥品食品衛(wèi)生研究所）提供
分析條件
儀器型號nexerax3 uhplc+lcms-8060nx
分析結(jié)果
1、[m+na]+或[m+li]+離子的形成和碰撞能（ce）的優(yōu)化
在流動相中添加na+或li+會通過陽離子化增加鈉或鋰加合物的形成。為了獲得所需的離子[m+na]+或[m+li]+ ，可在流動相中加入微量堿金屬。下圖為不同流動相條件下ctx1b的分析示例，本研究中分析的其他目標(biāo)化合物也獲得了相同的結(jié)果。當(dāng)向流動相中添加li+時，未檢測到 [m+na]+。這些結(jié)果表明，可以通過使用[m+li]+等替代離子來實現(xiàn)更高的靈敏度。
考察不同流動相條件下ctx1b的分析結(jié)果（sim）
但是，[m+na]+和[m+li]+母離子沒有提供任何有用的產(chǎn)物離子，因此優(yōu)化ce用以監(jiān)測[m+na]+>[m+na]+或[m+li]+>[m+li]+在mrm分析模式下提供最高的信噪比。ctx1b的優(yōu)化ce如下表所示。其余8種類似物的最佳ce以類似的方式進(jìn)行了優(yōu)化。
ce與峰面積或信噪比之間的關(guān)系
2、改善色譜峰分離度和靈敏度
在下圖中，比較了使用文獻(xiàn)方法、添加na的流動相（b）和添加li的流動相（c）對目標(biāo)化合物的分離。2,3-dihydroxyctx3c和51-hydroxyctx3、49-epi-ctx3c和ctx3c、ctx4a和ctx4b在新條件下表現(xiàn)出明顯更好的分離。除2,3-dihydroxyctx3c和51-hydroxyctx3外的6種類似物和ctx3c在加na流動相中具有良好的靈敏度。實驗證實，使用添加li的流動相時，9 種ctx類似物的靈敏度相當(dāng)。
9 種ctx類似物的mrm色譜圖（1 ng/ml nihs混標(biāo)樣品）
3、定量限（loq）的評估
使用jfrl標(biāo)準(zhǔn)品生成校準(zhǔn)曲線，以確認(rèn)[m+li]+> [m+li]+ 。校準(zhǔn)曲線最低點的每個色譜圖如下圖所示。確定校準(zhǔn)曲線的范圍，使每個校準(zhǔn)點的3次重復(fù)分析的平均準(zhǔn)確度為100±5%，并指定最低點作為 loq。用5 g魚肉制備1 ml測定溶液時，5種標(biāo)準(zhǔn)品的loq范圍為0.0004至0.0012μg/kg。
校準(zhǔn)曲線最低點的mrm色譜圖
小結(jié)
島津最新的技術(shù)介紹了一種通過向流動相添加微量堿金屬（如na+和li+）來提高ctx檢測靈敏度的方法。這項工作成功證明了使用lc/ms/ms在低濃度下分離和檢測ctx類似物，符合fda限度要求。
注：本產(chǎn)品僅用于研究，不能用于醫(yī)療診斷目的。